РазноеКу икс 70: 70 : Infiniti QX70 , .

Ку икс 70: 70 : Infiniti QX70 , .

Содержание

Infiniti QX70 — обзор, цены, видео, технические характеристики Инфинити КуИкс70

В 2017 году, Infiniti QX70 подвергся небольшому, но довольно знаковому рестайлингу. В первую очередь, этой премьерой, производитель дал понять, что надежды фанатов премиальной марки не оправдались и третьего поколения в ближайшее время не стоит. Иным довольно важным нововведением стала новая комплектация Limited. Она вобрала в себя всю роскошь, доступную в рамках этой модели и может похвастаться некоторыми уникальными чертами. У нее особая обивка сидений, кожаные вставки в дверях, прозрачные стоп-сигналы и 21-дюймовые колесные диски с уникальным дизайном. В остальном, автомобиль практически не подвергся изменениям. В глаза бросается лишь новый передний бампер. Он лишился классических противотуманных фар и получил две небольшие гирлянды светодиодных огней. Решетка радиатора получила немного иное оформление. Вместо массивных горизонтально ориентированных ребер можно увидеть черную сетку с множеством крошечных ячеек. В общем и целом, модель получила несколько незначительных и приятных косметических изменений, слегка освеживших ее образ.

Размеры

Инфинити Ку-Икс 70- это премиальный пятиместный кроссовер. Его габаритные размеры составляют: длина 4865 мм, ширина 1925 мм, высота 1650 мм, а колесная база- 2885 мм. Клиренс у автомобиля довольно скромный, по меркам данного класса- всего 184 миллиметра. Благодаря такой посадке, модель легко перенесет поездку по грунтовке, сможет заехать на бордюр средних размеров и сохранит великолепную плавность хода, даже на относительно разбитой дороге с твердым покрытием. Что касается самое подвески- она полностью независимая со стабилизаторами поперечной устойчивости, амортизаторами и стальными пружинами.

Багажник кроссовера не может порадовать хорошей вместительностью. При загрузке под полку и поднятых спинках второго ряда сидений, сзади остается всего 367 литров свободного пространства. Такого объема вполне хватит для повседневных задач городского жителя, однако, любителям семейных поездок, места может и не хватить. В любом случае, для перевозки крупногабаритных грузов, водитель может пожертвовать посадочными местами и сложить спинки заднего ряда.

Технические характеристики

На отечественном рынке, кроссовер предлагается с двумя различными двигателями, автоматическими коробками передач и исключительно с полным приводом. Благодаря наличию альтернативных агрегатов и отличной трансмиссии, модель обладает неплохими эксплуатационными характеристиками и может удовлетворить запросы даже искушенного покупателя.

Под капотом Infiniti QX70 находится V-образная атмосферная бензиновая шестерка на 3,7 литра. Солидный литраж и продвинутая система газораспределения позволили инженерам выжать 333 лошадиные силы при 7000 об/мин и 363 Нм крутящего момента при 5200 оборотах коленчатого вала в минуту. С таким табуном, кроссовер выстреливает до первой сотни за 6,8 секунды, максимально набирает 233 километра в час, однако, не может похвастаться экономичностью. Расход топлива составит порядка 12,2 литра бензина на сто километров пути в смешанном цикле движения.

Как более экономичную альтернативу, производитель предлагает турбодизельный трехлитровый V6. Турбокомпрессор позволили ему развивать 238 лошади при 3750 об/мин и целых 550 Нм в диапазоне от 1750 до 2500 об/мин. В такой комплектации, автомобиль набирает сотню за 8,3 секунды, разгоняется до 212 километров в час и расходует примерно 9 литров солярки на сотню в комбинированном цикле.

Итог

Ку-икс 70 давно успел себя зарекомендовать как одного из сильнейших игроков в своем сегменте. У него необычный и динамичный дизайн, который как нельзя лучше подчеркнет индивидуальность и статус своего владельца в обществе. Такой автомобиль будет органично выглядеть как в оживленном потоке, так и на скоростной магистрали. Салон- это царство роскошных материалов отделки, выверенной эргономики и бескомпромиссного комфорта. Даже длительная поездка или километровый затор не смогут доставить водителю и малейших неудобств. Производитель прекрасно понимает, что модели такого сегмента должны дарить незабываемые эмоции от каждой поездки. Именно поэтому, кроссовер оснащается мощными и технологичными агрегатами, являющимися сплавом передовых разработок и легендарного японского качества. Infiniti QX70- статусный и динамичный автомобиль на все случаи жизни.

Видео

отзывы об автомобилях Инфинити ку икс 70 на сайте Am.ru

Все маркиAudiBMWCadillacCheryChevroletChryslerCitroenDaewooDodgeFiatFordGreat WallHondaHyundaiInfinitiJeepKiaLand RoverLexusLifanMazdaMercedes-BenzMiniMitsubishiNissanOpelPeugeotPorscheRenaultSkodaSsangYongSubaruSuzukiToyotaVolkswagenVolvoВАЗ (Lada)ГАЗУАЗACAcuraAdlerAlfa RomeoAlpinaAlpineAMCArielAroAsiaAston MartinAudiAustinAustin HealeyBeijingBentleyBMWBorgwardBrillianceBristolBugattiBuickBYDCadillacCallawayCarbodiesCaterhamChanganChangFengChangheCheryChevroletChryslerCitroenCizetaCoggiolaDaciaDadiDaewooDaihatsuDaimlerDallasDatsunDeLoreanDe TomasoDodgeDongFengDSEagleEfiniExcaliburFAWFerrariFiatFiskerFordFotonFSOFuqiGeelyGenesisGeoGMCGreat WallGrozHafeiHaimaHavalHawtaiHindustanHoldenHondaHuangHaiHummerHurtanHyundaiInfinitiInnocentiInvictaIran KhodroIsderaIsuzuJACJaguarJeepJiangnanJinbeiJMCKiaKoenigseggLamborghiniLanciaLand RoverLandwindLexusLifanLincolnLotusLTILuxgenMahindraMarcosMarlinMarutiMaseratiMaybachMazdaMcLarenMegaMercedes-BenzMercuryMetrocabMGMinelliMiniMitsubishiMitsuokaMonte CarloMorganNissanNobleNysaOldsmobileOpelOscaPackardPaganiPanozPaykanPeroduaPeugeotPlymouthPontiacPorschePremierProtonPumaQorosQvaleRAMRavonReliantRenaissance CarsRenaultRimacRolls-RoyceRonartRoverSaabSaleenSamsungSantanaSaturnScionSEATShifengShuangHuanSkodaSMASmartSoueastSpectreSpykerSsangYongSubaruSuzukiTalbotTataTatraTeslaTianmaTianyeTofasToyotaTrabantTrumpchiTVRVauxhallVectorVenturiVolkswagenVolvoWartburgWestfieldWiesmannWillysWulingXin KaiZastavaZibarZotyeZXПрочие автоAurusDerwaysMarussiaVortexВАЗ (Lada)ГАЗДонинвестЗАЗЗИЛИЖКомбатЛуАЗМосквичСМЗТагАЗУАЗВсе моделиEX-SeriesFX-SeriesG-SeriesI-SeriesJ30JX-SeriesM-SeriesQ30Q40Q45Q50Q60Q70QX30QX4QX50QX56QX60QX70QX80

Год выпуска

от20212020201920182017201620152014201320122011201020092008200720062005200420032002200120001999199819971996199519941993199219911990198519801975197019651960194019201900-до20212020201920182017201620152014201320122011201020092008200720062005200420032002200120001999199819971996199519941993199219911990198519801975197019651960194019201900

Инфинити QX70 2017-2018 — фото и цена, видео, характеристики Infiniti QX70

Кроссовер Infiniti QX70 второго поколения выпускается с 2008 года, при этом изначально модель была известна под индексом FX и получила нынешнее название только в конце 2013-го.

В 2014 году вседорожник претерпел рестайлинг, в ходе которого специалисты Инфинити освежили облик модели и улучшили ее техническое оснащение. Обновление пошло автомобилю на пользу, поэтому даже сегодня Ку Икс 70 остается одним из самых продаваемых кроссоверов в своем классе.

Экстерьер

Перейти в фотогалерею нового Инфинити QX70

Мускулистый кузов Инфинити QX70 2017-2018 года имеет плавные, но в тоже время агрессивные изгибы, поэтому сразу же становится понятно, что перед нами автомобиль со спортивным характером.

Спереди в глаза бросаются грозный прищур раскосых биксеноновых фар, огромная хромированная решетка радиатора и рельефный капот. На колесах здесь красуются массивные литые диски. В базовой комплектации они 20-дюймовые, а в топовых (Sport и Hi-Tech) — диаметром 21 дюйм.

Автомобиль получил массивные стойки кузова и небольшие окна, что сделало его дизайн еще более поджарым, однако из-за этого несколько пострадала обзорность. На кроссовере ниспадающая крыша и сужающиеся к корме боковины — такое решение позволило придать облику легкость, при этом негативно отразилось на практичности салона.

В целом, внешность Инфинити Ку Икс 70 уже не так впечатляет, как в первые годы производства модели, однако назвать дизайн «семидесятки» устаревшим язык не поворачивается. На дороге такой автомобиль по-прежнему приковывает взгляды, подчеркивая статус владельца, а это, согласитесь, дорогого стоит.

Салон

В салоне возраст модели все же чувствуется, и некоторые элементы здесь уже не создают того эффекта премиальности, как в первые годы появления кроссовера на рынке.

Взять хотя бы приборную панель. Она выглядит ярко и хорошо читается, однако монохромный дисплей, расположенный посередине, сразу же напоминает о том, что Инфинити QX 70 II генерации выпускается уже почти 10 лет. Впрочем, действительно устаревших элементов дизайна в салоне не много, и они малозаметны.

Для отделки интерьера японцы использовали только высококачественные материалы — кожу и мягкий пластик. Последний здесь можно встретить не только на передней панели, но и даже в нижней части салона (например, на центральном тоннеле), чем могут похвастаться далеко не все конкуренты.

Руль и водительское кресло в Ку Икс 70 радуют широким диапазоном регулировок, так что с комфортом здесь сможет разместиться человек любой комплектации. Само сиденье очень удобное и ни капли не стесняет движений, при этом плотно удерживая седока даже на крутых виражах.

Все самые важные органы управления находятся прямо под рукой. Их расположение интуитивно понятно и легко запоминается. Привыкать придется только к мультимедийной системе со скромным экраном и не самой яркой графикой.

Дело в том, что управлять функциями развлекательного комплекса японцы предлагают с шайбочки, неудачно расположенной на самой вершине центральной консоли. Сам экран сенсорный, однако водителю все равно придется тянуться либо к нему, либо к упомянутой шайбе, что делать во время движения не совсем удобно.

Кроме того, в машине наблюдается явная нехватка мест для хранения вещей. В салоне имеется лишь несколько небольших ниш и ящичков под мелочевку.

Характеристики

Подробные технические характеристики Infiniti QX70

Габаритные размеры Infiniti QX70 составляют 4 865, 1 925 и 1 650 мм в длину, ширину и высоту соответственно.

Колесная база модели равна 2 885 мм. В снаряженном состоянии автомобиль весит от 2 010 до 2 107 кг (в зависимости от выбранной комплектации). Дорожный просвет — 184 миллиметра.

Салон КуИкс 70 достаточно просторный, однако в угоду этому создатели пожертвовали багажником, объем которого равен всего 376 литрам. Впрочем, при необходимости всегда можно сложить задний ряд. К сожалению, ровного пола здесь не получится, зато вместимость отсека увеличится до 1 870 л.

Под полом багажника находится еще одна ниша, вот только находится там не привычная докатка, а сабвуфер аудиосистемы Bose. Весьма странное решение.

Спереди и сзади на колесах кроссовера установлены дисковые вентилируемые тормоза. Что касается подвески, то тут она независимая многорычажная. Линейка силовых агрегатов Инфинити QX 70 представлена следующими моторами:

  • 3,0-литровый дизель V6 с отдачей 238 л.с. и 500 Нм
  • 3,7-литровая бензиновая «шестерка» с отдачей 333 л.с. и 363 Нм
  • 5,0-литровая бензиновая «восьмерка» с отдачей 400 л. с. и 500 Нм

Все двигатели работают в связке с семиступенчатым автоматом и дополнены системой полного привода.

Цена в России

Комплектации Инфинити QX70 2021 в России

Смотреть еще видео тест-драйвы Инфинити Ку Икс 70

Отзыв владельца Infiniti QX70 (Инфинити КуИкс 70) 2014 г.

Infiniti QX70, 2014 г.в.

Год выпуска: 2014

Кузов: Внедорожник (5 дв.)

Двигатель: 3.0 л, Дизель, АКПП, 238 л.с.

Приобретен: Июнь 2014 г.

Пробег: 12,000 км

Привод: Полный

Практичность

Надежность

Динамичность

Комфорт

Управляемость

Расходы на авто большие

Это мой первый автомобиль на дизеле, до этого были только бензиновые. Решил попробовать что-то новое для себя. Все таки 550Нм/2000 оборотов и в 2 раза меньший расход топлива по сравнению с бензином убедили меня приобрести себе авто именно с дизельным мотором, да и дорожный налог за 238л. с. ощутимо меньше чем 333л. с.

Автомобиль полностью оправдал ожидания — красивый, запоминающийся, мощный, экономный и динамичный. Период обкатки до 6000 проходил бережно, не раскручивал двигатель более 3000 оборотов (хотя так хотелось :)), и старался первые 2000 избегать движения с постоянной скоростью чтобы все детали хорошенько друг к другу притерлись. После того, как обкатка была пройдена, попробовал кикдаун и автомобиль оправдал ожидания, до 120км/ч тяга сумасшедшая. Более чем достаточно для резвого перестроения и обгонов.

Сзади места конечно маловато, особенно за водителем. Мой рост 185 см, поэтому сиденье отодвигаю почти полностью и до конца выдвигаю руль на себя. В багажнике места хватает, но если перевозить, что-то габаритное, приходится раскладывать задние сиденья, а это значит, что больше 2-х человек в салон не поместится.

Жаль не пришлось испытать машинку зимой, в конце ноября всей семьей улетели за границу. Хотя предпусковой подогреватель и подогрев омывайки я установил еще у дилера. Хотя при температуре +5 очень комфортно садиться в прогретый салон и не тошнить на малых оборотах в ожидании прогрева двигателя.

В общем машинка полностью оправдала ожидания. Жаль с ней приходится расставаться. Кризис внес свои коррективы и чтобы продержаться на плаву нужны финансовые вливания. Так что если кто раздумывает брать или нет, брать однозначно! Но при этом соизмеряя свои финансовые возможности…

Плюсы

* Свой неповторимый дизайн.
* Мощь.
* В 2 раза меньший расход по сравнению с бензином и соответственно дорожный налог.
* Адаптивный круиз вообще бомба, особенно по вялотекущей пробке без остановок.
* Вентиляция сидений, подогрев есть почти у всех, а вот летом на кожаном салоне попа потеет.

Минусы

* Небольшая вибрация на холостых оборотах.
* Форма багажника, что-то высокое сложно запихнуть не разложив сиденья.
* Цена на КАСКО после кризиса.

Стоит ли покупать такой автомобиль? Каким будет Ваше следующее авто?

Давно хотел себе машину такого уровня, наконец случай представился. Совет будущим владельцам: ухаживайте за машиной, своевременно проходите ТО, по возможности старайтесь объезжать ямки, не прыгайте по лежачим на скорости, заправляйтесь проверенной горючкой и не насилуйте движок на холодную и машинка долго будет вас радовать своими ходовыми качествами и реже будет проситься в сервис. Удачи на дорогах.


Шины, диски на Инфинити QX70 (Infiniti QX70)

Infiniti QX70 — компактный кроссовер представительского класса, который выпускается компанией Nissan под маркой Infiniti. Этот автомобиль до 2008 года выпускался под названием Infiniti FX и продавался только на японском рынке.

Сборка авто происходит как в Японии (город Тотиги), так и в России, в Санкт-Петербурге.

Это мощный кроссовер, шины которого должны иметь не только высокую степень выносливости и прочности, но еще и агрессивный, строгий внешний вид, чтобы соответствовать автомобилю.

Какие типоразмеры шин и дисков для автомобиля Инфинити QX70 рекомендует компания KOLOBOX?

Перед тем, как приступить к выбору колес для этого авто, необходимо определить два момента:

  • Год его выпуска;
  • Модификацию.

Исходя из параметров, нужно подобрать типоразмер покрышек и дисков, который соответствует транспортному средству.

Инфинити Ку Икс 70 выпускается с 2013 года и имеет единственную модификацию. Комплектуется этот автомобиль двумя размерами колес: 235/60 R18 и 265/45 R21, т.е. диаметр 18 и 21 дюймов, ширина 235 и 265 дюймов, а профиль 60 и 45 % соответственно.

Такова заводская комплектация, которая не отменяет того факта, что многие часть счастливых обладателей Infiniti QX70 прибегают к альтернативным размерам. Необходимо понимать, что завод-производитель гарантирует безопасность только на размеры автошин, которые представлены в таблице. Иные размеры исключают эту гарантию надежности во время вождения.

Подбираем зимние шины для автомобиля Infiniti QX70

Зимние шины для Инфинити QX70 Pirelli Scorpion Ice And Snow
Kumho Winter Craft
Yokohama Geolandar
Nokian Nordman RS2SUV
Hankook Winter i*cept X
Dunlop Winter Maxx

Подбираем летнюю резину для автомобиля Инфинити Ку Икс 70

Обратившись в компанию KOLOBOX, Вы получаете исчерпывающую консультацию по поводу шин для лета, которые подходят Infiniti QX70. Но каждому водителю желательно и самостоятельно понимать, от каких параметров отталкиваются специалисты в своих рекомендациях.

В первую очередь необходимо обращать внимание на два параметра: индексы скорости и нагрузки. Эти данные указаны в маркировке покрышек. Они должны полностью соответствовать массе автомобиля и максимальной скорости, которую он развивает. Эта информация представлена в технической документации, которая прилагается к средству передвижения.

Для размера 265/60 R18 эти параметры таковы: 109V (до 1030 кг и 240 км/ч). Если размер шин 265/45 R21, то 104W (до 900 кг и до 270 км/ч).

Ниже размещено несколько вариантов автопокрышек на лето:

Летние шины для Инфинити QX70 Nokian Rotiiva HT
Yokohama Geolandar SUV
Dunlop Grandtrek PT3
Yokohama Geolandar
Dunlop SP Sport Maxx
Nokian Hakka Black2 SUV

Выбираем диски для авто Infiniti QX70

Характеристики колесных дисков это автомобиля следующие:

  • Диаметр, как у шин, 18 и 20 дюймов (возможны альтернативные варианты с диаметрами 21 и 22 дюймов).
  • Ширина обода 8 дюймов.
  • Сверловка 5*114,3, т.е. на окружности, диаметр которой 114,3 мм, располагаются пять отверстий для крепежных гаек.
  • Диаметр отверстия под ступицу 66,1 мм.

Какое давление необходимо поддерживать в покрышках автомобиля Инфинити QX70?

Рекомендованное давление воздуха в шинах Инфинити размещается в таблице, которую завод-производитель приклеивает на кузов авто, рядом с сиденьем водителя. При средней загруженности автомобиля (до трех человек в салоне и до одного багажа) в передних и задних колесах следует поддерживать давление на уровне 2,3 Атмосфер.

Как размер шин и дисков влияет на характеристики авто?

Расход топлива Инфинити Ку Икс 70: 3.0, 3.7, 5.0 на 100 км пути |Расход.ру

Номинальный расход топлива является одной из самых информативных и важных для водителя характеристикой автомобиля. Именно ее часто используют производители для рекламы и продвижения той или иной новой автомодели.

Среди владельцев автомобилей с пробегом считается приемлемым расходование бензина или дизеля до 10 литров на 100 километров. В зарубежных странах этот показатель указывается в милях, поэтому часто нужен перерасчет в «родные» единицы. Очень полезными считаются таблицы расхода топлива, доступные в данном разделе сайта.

О чем говорит показатель расхода топлива? Что означает эта характеристика? Речь идет о расходе углеводородного топлива. Например, для внедорожника цифра соответствует 9.5 литрам на 100 км. Она вполне приемлема, прежде всего, за счет веса и мощности автомобиля. Показатель может быть снижен за счет следующего:

  • использования систем рекуперации энергии при торможении;
  • облегчения веса автомобиля при замене элементов кузова и ходовой инновационными материалами;
  • совершенствования двигателя;
  • замены выхлопной системы.

Для новых моделей расход в 6 л/100 км считается вполне «крейсерским» показателем, но он будет выше для тяжелых внедорожников и пикапов и ниже для маленьких гибридов. Необходимую информацию можно найти в размещенных таблицах.

Что делать, если расход топлива выше номинального? Если автомобиль потребляет больше горючего и не соответствует указанному в таблице номинальному показателю, то это означает наличие неисправности. Насколько она серьезная, и как ее можно устранить, подскажут опытные мастера сервисного центра. В отдельных случаях тюнинг позволяет еще более оптимизировать расход топлива, но это обычно обеспечивается за счет облегчения конструкции кузова или при замене двигателя. Конкретные рекомендации могут дать профессиональные автомобильные техники.

Расход топлива Инфинити Ку Икс 70 составляет от 9 до 13.1 л на 100 км.

Infiniti QX70 выпускается со следующими типами топлива: Дизельное топливо, Бензин.

Расход топлива Infiniti QX70 2013, джип/suv 5 дв., 2 поколение

Объем двигателяМощностьТрансмиссияПриводТопливоРасход
3. 0 л238 л.с.АКППполный привод (4WD)Дизельное топливо9,0
3.7 л333 л.с.АКППполный привод (4WD)Бензин12,2
5.0 л400 л.с.АКППполный привод (4WD)Бензин13,1

Автозапчасти INFINITI QX80 (Инфинити Ку икс 80)

  1. Магазин автомобильных запчастей
  2. INFINITI 🚘
  3. QX80
Подобрать по автомобилю

ACURAALFA ROMEOAUDIBMWCADILLACCHEVROLETCHRYSLERCITROENDACIADAEWOODAIHATSUDODGEFIATFORDGEELYHONDAHUMMERHYUNDAIINFINITIISUZUIVECOJAGUARJEEPKIALANCIALAND ROVERLEXUSMAZDAMERCEDES-BENZMINIMITSUBISHINISSANOPELPEUGEOTPORSCHERENAULTROVERSAABSEATSKODASMARTSSANGYONGSUBARUSUZUKITOYOTAVOLKSWAGENVOLVOEXFXGJXM35M37Q30Q50Q60Q70QX30QX4QX50QX56QX60QX70QX80201320142015201620172018201920202021

Найти

В продаже оригинальные запасные части и их аналоги на INFINITI QX80. Полная информация о характеристиках авто деталей, в том числе размеры и применимость в авто. Подбор по VIN коду (номеру кузова) автомобиля.

Каталог оригинальных запчастей на INFINITI QX80 и их аналогов

Доступные модификации INFINITI QX80 (Инфинити Ку икс 80)

Объём двигателя 5.6
Годы выпуска: 2013 2014 2015 2016 2017 2018 2019 2020 2021
  • 5.6

    2013 — настоящее время

    внедорожник

    5. 6 л. , бензин

    405 л.с. 298 кВт

    Код двигателя : VK56VD

  • 5.6 AWD

    2013 — настоящее время

    внедорожник

    5.6 л. , бензин

    405 л. с. 298 кВт

    Код двигателя : VK56VD

  • 5.6 AWD

    2013 — настоящее время

    внедорожник

    5.6 л. , бензин

    400 л.с. 294 кВт

    Код двигателя : VK56VD

  • В продаже есть запасные части на другие модели INFINITI

    XRCC6 Рентгеновский ремонт перекрестного комплемента 6 [Homo sapiens (человек)] — Ген

    НОВЫЙ Попробуйте новую таблицу расшифровок

    RefSeqs поддерживается независимо от аннотированных Геномы

    Эти эталонные последовательности существуют независимо от построения генома. Объясните

    Эти эталонные последовательности курируются независимо от генома. цикл аннотаций, поэтому их версии могут не совпадать с версиями RefSeq в текущем построение генома.Определите несоответствие версий, сравнив версию RefSeq в этот раздел к разделу, указанному в геномных регионах, стенограммы и продукты, указанные выше.

    мРНК и белок (белки)
    1. NM_001288976.2 → NP_001275905.1 Рентгеновская репарация перекрестно комплементарная изоформа 1 белка 6

      См. Идентичные белки и их аннотированные местоположения для NP_001275905.1

      Статус: ПЕРЕСМОТРЕН

      Описание
      Вариант транскрипции: этот вариант (2) отличается 5 ‘UTR по сравнению с вариантом 1.Варианты 1 и 2 кодируют один и тот же белок (изоформа 1).
      Исходная последовательность (и)
      BC001583, BU3, DA647513, DA718140, DC383335, Z83840
      Консенсус CDS
      CCDS14021. 1
      UniProtKB / Swiss-Prot
      P12956
      UniProtKB / TrEMBL
      A0A024R1N4
      Связанные
      ENSP00000352257.4, ENST00000359308.8
      Консервированные домены (1) сводка
      TIGR00578
      Расположение: 26 → 608
      ку70; АТФ-зависимая ДНК-геликаза II, субъединица 70 кДа (ku70)
    2. NM_001288977.2 → NP_001275906.1 Рентгеновская репарация перекрестно комплементарная изоформа 2 белка 6

      См. Идентичные белки и их аннотированные местоположения для NP_001275906.1

      Статус: ПЕРЕСМОТРЕН

      Описание
      Вариант транскрипции
      : В этом варианте (3) используется альтернативный сайт сплайсинга в рамке в 5′-кодирующей области. Кодируемый белок (изоформа 2) короче по сравнению с изоформой 1.
      Исходная последовательность (и)
      AK055786, BQ217843, BU584415, BU751953
      Консенсус CDS
      CCDS74870.1
      UniProtKB / Swiss-Prot
      P12956
      Связанные
      ENSP00000384941.3, ENST00000402580.7
      Консервированные домены (1) сводка
      TIGR00578
      Расположение: 26 → 567
      ку70; АТФ-зависимая ДНК-геликаза II, субъединица 70 кДа (ku70)
    3. NM_001288978.2 → NP_001275907.1 Изоформа 3 белка 6, перекрестно комплементарная при рентгеновской репарации,

      Статус: ПЕРЕСМОТРЕН

      Описание
      Вариант транскрипта
      : в этом варианте (4) отсутствует альтернативный экзон в рамке считывания и используется нисходящий старт трансляции по сравнению с вариантом 1. Кодируемый белок (изоформа 3) имеет более короткий N-конец по сравнению с изоформой 1.
      Исходная последовательность (и)
      AK293439, AK304580, BI222708, BU751953, Z83840
      Консенсус CDS
      CCDS74871.1
      UniProtKB / TrEMBL
      B1AHC9, B4DE32, B4E356
      Связанные
      ENSP00000403679.3, ENST00000428575.6
      Консервированные домены (1) сводка
      TIGR00578
      Расположение: 16 → 558
      ку70; АТФ-зависимая ДНК-геликаза II, субъединица 70 кДа (ku70)
    4. NM_001469.5 → NP_001460.1 Изоформа 1 белка 6, перекрестно комплементарная при рентгеновской репарации,

      См. Идентичные белки и их аннотированные местоположения для NP_001460. 1

      Статус: ПЕРЕСМОТРЕН

      Описание
      Вариант транскрипта
      : этот вариант (1) представляет самый длинный транскрипт и кодирует самый длинный белок (изоформа 1). Варианты 1 и 2 кодируют один и тот же белок.
      Исходная последовательность (и)
      AK055786, BC012154, BC018259
      Консенсус CDS
      CCDS14021.1
      UniProtKB / Swiss-Prot
      P12956
      UniProtKB / TrEMBL
      A0A024R1N4
      Связанные
      ENSP00000353192.3, ENST00000360079.8
      Консервированные домены (1) сводка
      TIGR00578
      Расположение: 26 → 608
      ку70; АТФ-зависимая ДНК-геликаза II, субъединица 70 кДа (ku70)

    RefSeqs of Annotated Genomes: Homo sapiens Обновленная аннотация, выпуск 109.

    20210514

    Следующие разделы содержат ссылочные последовательности, принадлежащие специфическая конструкция генома. Объясните

    Этот раздел включает геномную ссылку Последовательности (RefSeqs) из всех сборок, на которых аннотирован этот ген, например RefSeqs для хромосом и каркасов (контигов) как из эталонных, так и из альтернативных сборки. Здесь также представлены модельные РНК и белки.

    Ссылка ГРЧ48.p13 Первичная сборка

    Геномный
    1. NC_000022.11 Ссылка ГРЧ48.р13 Первичная сборка

      Диапазон
      41621295..41664041
      Скачать
      GenBank, FASTA, Sequence Viewer (графика)

    Ku70 необходим для позднего развития В-клеток и переключения классов тяжелых цепей иммуноглобулинов

    Рекомбинация с переключением класса тяжелой цепи (HC) иммуноглобулина (Ig) — это поздний процесс B-клеток, который включает внутрихромосомную перестройку ДНК. Ku70 и Ku80 образуют комплекс, связывающий конец ДНК, необходимый для репарации двухцепочечных разрывов ДНК и рекомбинации V (D) J. У мышей Ku70 (- / -) (K70T), как и у мышей с геном активации рекомбинации (RAG) -1 или с дефицитом RAG-2 (R1T или R2T), нарушено развитие B- и T-клеток на ранней стадии предшественников, что считается по крайней мере частично в результате дефектной рекомбинации V (D) J (Gu, Y., KJ Seidl, GA Rathbun, C. Zhu, JP Manis, N. van der Stoep, L. Davidson, HL Cheng, JM Sekiguchi, K Франк и др. 1997.Иммунитет. 7: 653-665; Оуян, Х., А. Нуссенцвейг, А. Куримаса, В. Соареш, X. Ли, К. Кордон-Кардо, В. Ли, Н. Чеонг, М. Нуссенцвейг, Г. Илиакис и др. 1997. J. Exp. Med. 186: 921-929). Поэтому, чтобы изучить потенциальную роль Ku70 в CSR, мы создали мышей K70T, которые несут локус HC зародышевой линии, в котором область JH была заменена функционально перестроенным трансгеном VH (D) JH и легкой цепи лямбда Ig (обозначается как K70T. / HL мышей). Ранее мы показали, что В-клетки от мышей R1T или R2T, несущих эти перестроенные гены Ig (мыши R1T / HL или R2T / HL), могут подвергаться CSR к изотипам IgG (Lansford, R. , J. Manis, E. Sonoda, K. Rajewsky, F. Alt. 1998. Int. Иммунол. 10: 325-332). Мыши K70T / HL имели значительное количество периферических поверхностных IgM + B-клеток, которые генерировали уровни IgM в сыворотке, аналогичные уровням мышей R2T / HL. Однако, в отличие от мышей R2T / HL, у мышей K70T / HL не было обнаруживаемых изотипов сывороточного IgG. Культивирование in vitro B-клеток K70T / HL с агентами, которые индуцируют CSR в нормальных B-клетках или R2T / HL, действительно приводило к индукции транскриптов CH зародышевой линии, что указывает на то, что исходные сигнальные пути для CSR были интактными в клетках K70T / HL.Однако лечение такими агентами не привело к обнаружению CSR B-клетками K70T / HL, а вместо этого привело к гибели клеток в течение 72 часов. Мы пришли к выводу, что Ku70 необходим для генерации В-клеток, которые претерпели переключение класса Ig HC. Обсуждаются потенциальные роли Ku70 в процессе CSR.

    Нацеливание на белок

    Ku с помощью малой интерферирующей РНК Ku70 усиливает ответ раковых клеток человека на ингибитор топоизомеразы II и гамма-излучение

    Abstract

    Белок Ku представляет собой гетеродимер (Ku70 и Ku86), который, как известно, играет важную роль в рекомбинации V (D) J, апоптоз, слияние теломер и восстановление двухцепочечных разрывов. Его роль в двухцепочечных разрывах имеет отношение к терапии рака, потому что недостаток Ku86 вызывает один из наиболее чувствительных к облучению фенотипов (клетки хомяка, XRS5). Хотя известно, что гетеродимер необходим для различных функций этого белка, влияние нацеливания Ku на раковые клетки человека не было продемонстрировано из-за отсутствия подходящих подходов. Также неизвестно, требуется ли полный нокаут белка Ku для повышения чувствительности клеток человека к γ-излучению, поскольку белок Ku гораздо более распространен в клетках человека, чем в клетках хомяка.В данной статье мы исследовали прямой эффект истощения Ku70 в клетках эпителиоида шейки матки (HeLa) и карциномы толстой кишки (HCT116) человека. Мы специально нацелены на мРНК Ku70 с помощью малой интерферирующей РНК (миРНК). Из пяти синтезированных миРНК Ku70 три ингибировали экспрессию Ku70 до 70% в клетках HeLa. Мы проверили влияние химически синтезированных миРНК для целевой последовательности 5 (CS # 5) на реакцию клеток HeLa через 72 часа после трансфекции на γ-излучение и этопозид, поскольку это показало максимальное ингибирование экспрессии Ku70. Ku70 siRNA вызывала уменьшение выживающей фракции облученных клеток HeLa в несколько раз. Аналогичные сенсибилизирующие эффекты наблюдались для этопозида, ингибитора топоизомеразы II. Исследования клеток HCT116 с использованием той же миРНК Ku70 (CS # 5) показали прямую корреляцию между экспрессией Ku70 и сенсибилизацией к облучению и лечению этопозидом.

    Ключевые слова:
    • Молекулярные мишени радиационного ответа
    • Подавление и реактивация экспрессии генов

    Введение

    Целевые белки, ответственные за устойчивость раковых клеток к гамма-излучению и химиотерапевтическим агентам, уже давно вызывают интерес (1 –4).Самые последние молекулярно-биологические исследования были сосредоточены на механизмах передачи сигналов, ответственных за клеточную пролиферацию и рост (4-7). Вполне возможно, что нацеливание на сигнальные пути, опосредованные фосфорилированием, киназами, рецепторами роста и онкогенами, может дать клинически значимые подходы для специфического уничтожения раковых клеток; при условии, что только раковые клетки, а не нормальные клетки, полагаются на эти пути для выживания. Имеются многочисленные доклинические доказательства того, что эти ингибиторы могут усиливать противоопухолевые эффекты многих цитотоксических агентов (8).Однако эффективность этих ингибиторов для усиления эффектов цитотоксических агентов в клинических исследованиях на людях четко не установлена ​​(8). Baker et al. (9) показали, что сверхэкспрессия тиоредоксина, который играет определенную роль в росте нескольких раковых клеток, эффективна для снижения чувствительности клеток млекопитающих к определенным химиотерапевтическим агентам. Однако недавно мы показали, что ингибирование окислительного пентозофосфатного цикла, который поставляет НАДФН, необходимый для функции тиоредоксина и других белков, не сенсибилизирует доброкачественные клетки яичника китайского хомячка к этопозиду, 3 и лишь незначительно сенсибилизирует эти клетки к нему. γ-излучение (10).Эти результаты показали, что окислительно-восстановительный цикл, опосредованный пентозофосфатным циклом, может играть лишь незначительную роль в клеточном ответе на агенты, повреждающие ДНК. Наиболее важные нисходящие сигнальные пути, которые могут играть важную роль в сенсибилизации раковых клеток к агентам, повреждающим ДНК, — это пути, участвующие в апоптозе (11-13). Ранее мы показали, что ДНК является важной мишенью при радиационно-индуцированном апоптозе, предполагая, что как митотическая, так и апоптотическая гибель клеток вызываются повреждениями ДНК после облучения (14).

    Ku-белок играет важную роль в репарации двухцепочечных разрывов ДНК, вызванных гамма-излучением и некоторыми химиотерапевтическими агентами (15–19). Ключевой системой репарации двухцепочечных разрывов ДНК является негомологичное соединение концов (20, 21). Роль Ku — связываться с концами ДНК, облегчая координацию других белков репарации ДНК (20, 21). Биохимические и генетические исследования с использованием мутантных клеточных линий грызунов, чувствительных к ионизирующему излучению, идентифицировали по крайней мере четыре гена, XRCC4, XRCC5, XRCC6 и XRCC7, которые необходимы для негомологичного соединения концов (20, 21). XRCC4 кодирует ядерный фосфопротеин 38 кДа, который прочно связывается с ДНК-лигазой IV (21). XRCC7 кодирует каталитическую субъединицу 460 кДа (DNA-PKcs) ДНК-PK (20, 21). XRCC5 и XRCC6 кодируют субъединицы 86 и 70 кДа, соответственно, аутоантигена Ku, белка, связывающего конец ДНК, и регуляторной субъединицы DNA-PK (20, 21). Считается, что протеинкиназная активность DNA-PK стимулируется его ассоциацией с Ku, связанным с концом ДНК (20, 21). Гетеродимер Ku связывается с концами ДНК не зависимым от последовательности образом (20, 21).Для ДНК-связывающей активности Ku необходимы восстановленные сульфгидрильные группы в бесклеточных системах (22). Гетеродимер Ku содержит 14 остатков цистеина, 5 из которых расположены в Ku70, который находится в контакте с сайтом связывания ДНК (22). В недавнем отчете мы показали, что функция белка Ku может быть значительно снижена в клетках яичника китайского хомячка с дефицитом глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы за счет окисления тиола Ku-белка (23). Однако этот биохимический подход эффективен только для клеток с дефицитом глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы.

    В этом исследовании мы использовали новый молекулярный подход для специфической нацеливания мРНК Ku70. Мы показываем, что этот подход подавляет экспрессию белка Ku70 и вызывает повышенный ответ раковых клеток на γ-излучение и ингибитор топоизомеразы II.

    Материалы и методы

    Клетки и питательная среда

    Раковые клетки HeLa и HCT116 были получены из Американской коллекции типовых культур (Манассас, Вирджиния). Эти клетки выращивали в среде McCoy 5A с 10% FCS и 20 ммоль / л HEPES при 37 ° C в увлажненном инкубаторе с 5% CO 2 .

    Ku70 Синтез малых интерферирующих РНК

    In vitro – транскрибируемая миРНК. Нуклеотидная последовательность гена Ku человека (номер доступа BC010034) была получена из Национального центра биотехнологической информации. Двадцать один-мерный нуклеотид с исходными аминокислотными нуклеотидами для нескольких целевых последовательностей были отобраны с использованием программного обеспечения Ambion. Для получения in vitro транскрибируемой малой интерферирующей РНК (siRNA) против Ku70 мы использовали конструктор pSilencer siRNA в соответствии с рекомендациями производителя (Ambion, Austin, TX).Смысловой и антисмысловой для двух последовательностей-мишеней Ku70-3 и Ku70-4 для in vitro, транскрибируемой миРНК, показаны ниже: и

    Эти олигонуклеотиды гибридизовали с промоторным праймером Т7, поставляемым в наборе производителя, и использовали в соответствии с указаниями.

    Химически синтезированная миРНК. Мы также получили миРНК путем химического синтеза на предприятии по синтезу олигонуклеотидов миРНК компании Ambion. Мы использовали следующие смысловые и антисмысловые олигонуклеотиды для последовательностей-мишеней Ku70-3, Ku70-4 и Ku70-5 для получения химически синтезированной миРНК против Ku70.

    • (a) миРНК для Ku70-3 состоит из гибридизированных смысловых 5′-UUCAGGUGACUCCUCCAGGTT-3 ‘и антисмысловых 5′-CCUGGAGGAGUCACCUGAATT-3’ олигонуклеотидов.

    • (b) миРНК для Ku70-4 состоит из гибридизированных смысловых 5′-UUCUCUUGGUAACUUUCCCTT-3 ‘и антисмысловых 5′-GGGAAAGUUACCAAGAGAATT-3’ олигонуклеотидов.

    • (c) миРНК для Ku70-5 состоит из гибридизированных смысловых 5′-GAUGCCCUUUACUGAAAAATT-3 ‘и антисмысловых 5′-UUUUUCAGUAAAGGGCAUCTT-3’ олигонуклеотидов.

    Генерированная РНКаза III. Мы также создали миРНК путем ферментативного расщепления длинной in vitro -транскрибируемой двухцепочечной молекулы РНК бактериальным ферментом РНКазой III. Ферментативное расщепление дает двухцепочечные миРНК, соответствующие нескольким различным последовательностям-мишеням. Ожидается, что смесь нескольких разных миРНК, нацеленных на разные последовательности-мишени в гене, будет эффективной в большинстве клеток. Чтобы получить длинную двухцепочечную РНК Ku70, мы сначала амплифицировали область Ku70 размером ~ 200 п.н. с использованием праймеров 5′-AATTTAATACGACTCACTATAGGCTATGGTACCGAGAAAGACA-3 ‘и 5’-AATTTAATACGACTCACTATAGGCTAAAGAGGGTTGGCACAGGAC, полученных из клеток, комплементарных TTGGCACAGGAC. ПЦР-продукт 200 пар оснований обрабатывали на 1% агарозном геле и очищали. Затем были получены длинная двухцепочечная РНК и миРНК в соответствии с инструкциями из набора для коктейлей миРНК (Ambion).

    siRNA # 1 от Ambion (каталог № 4850) использовали в этих исследованиях в качестве отрицательного контроля.

    Ku70 siRNA Transfection

    Сорок тысяч клеток HeLa или HCT116 в общем объеме 370 мкл среды McCoy 5A помещали в 24-луночные планшеты и инкубировали в течение 24 часов. Среду McCoy 5A аспирировали, и клетки промывали сбалансированным солевым раствором Эрла с 20 ммоль / л HEPES.В клетки добавляли 200 мкл свежей среды DMEM и инкубировали в течение 1 часа при 37 ° C в увлажненном инкубаторе с 5% CO 2 . Клетки обрабатывали миРНК Ku70 или скремблированной миРНК в качестве отрицательного контроля в соответствии с инструкциями производителя. Вкратце, миРНК и олигофектамин смешивали отдельно с OptiMem и инкубировали в течение 15 минут при комнатной температуре. Эти реагенты объединяли и инкубировали еще 15 минут перед добавлением к клеткам в среде DMEM без пенициллина и стрептомицина.Влияние миРНК Ku70 на белок Ku70 определяли вестерн-блоттингом через 24, 48 и 72 часа после трансфекции. Эффекты гамма-излучения и ядов топоизомеразы II на клетки HeLa оценивали через 72 часа после трансфекции миРНК Ku70, поскольку 72-часовая инкубация с миРНК показала максимальное ингибирование экспрессии Ku70. Эффекты гамма-излучения и ядов топоизомеразы II на клетки HCT116 оценивали через 24, 48 и 72 часа после трансфекции миРНК Ku70, чтобы определить, существует ли прямая корреляция между экспрессией Ku70 и сенсибилизацией к радиации и этопозиду.

    Вестерн-блот-анализ

    Общее количество клеточного белка Ku70 определяли количественно с помощью вестерн-блоттинга и анализа изображений NIH. Раковые клетки HeLa и HCT116, обработанные миРНК Ku70 и без них, трижды промывали PBS и смешивали с 200 мкл лизирующего буфера [20 ммоль / л Трис (pH 7,6), 150 ммоль / л NaCl, 2 ммоль / л EDTA, 10% глицерин. , 1% Triton X-100, 1 ммоль / л DTT, 1 ммоль / л ортованадат, 2 ммоль / л фенилметилсульфонилфторид], содержащий 6 мкл коктейля ингибиторов протеаз (Sigma, St.Louis, MO) и 6 мкл восстанавливающего агента NuPAGE. Клетки в буфере для лизиса в чашке удаляли с помощью тефлонового скребка и переносили в пробирку Эппендорфа с помощью микропипетки. Клетки гомогенизировали с использованием шприца на 1 мл (игла 22 размера), центрифугировали при 6000 × g в течение 2 минут в микроцентрифуге (Fisher 59A) и супернатант хранили при -80 ° C. Белковые экстракты (10 мкг) инкубировали в буфере для образцов NuPAGE, содержащем 4 мкл восстанавливающего агента NuPAGE, при 70 ° C в течение 10 минут. Затем эти образцы подвергали электрофорезу в 10% -ном геле Bis / Tris от NuPAGE при 200 В в течение 60 минут в рабочем буфере MOPS SDS (NuPAGE).Белки переносили на нитроцеллюлозу электрофорезом в буфере для переноса NuPAGE при 20 В в течение 60 минут. Нитроцеллюлозный блот инкубировали с 10 мл блокирующего буфера в течение 1,5 часов при комнатной температуре на качалке и хранили в холодной комнате в течение ночи. Нитроцеллюлозную бумагу промывали пять раз PBS, содержащим 0,1% Tween 20 (PBST), а затем инкубировали с 20 мкл первичного антитела Ku (p70) (Ab-4, клон N3h20, Neomarkers, Fremont, CA) в 10 мл блокирующего буфера. в течение 2 часов при комнатной температуре.Нитроцеллюлозную бумагу промывали пять раз PBST перед инкубацией с вторичным мышиным антителом, меченным пероксидазой, в течение 1 часа, в соответствии с инструкциями производителя (Amersham, Piscataway, NJ), и полосы детектировали с использованием стандартного набора для усиленной хемилюминесценции. Плотность полос в полученной пленке была определена количественно с использованием анализа изображений NIH.

    Иммунофлуоресценция и визуализация

    Иммунофлуоресцентный анализ выполняли следующим образом: сначала в указанное время после трансфекции в 24-луночной чашке для тканевых культур клетки фиксировали 5-минутной инкубацией в свежем 4% параформальдегиде / PBS при комнатной температуре. .Клетки промывали 1 мл 1 × PBS, повышали проницаемость путем добавления 0,1% Triton X-100 / PBS и инкубировали в течение 5 минут при комнатной температуре. Затем клетки промывали 1 × PBS, блокировали 3% BSA / PBS в течение 1 часа и промывали 1 × PBS. Первичное антитело Ku70 (Ambion, № по каталогу 4320) разводили 1: 200 в PBS, смешивали с клетками и инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре. Затем первичное антитело удаляли, клетки промывали 1 мл PBS и инкубировали в течение 1 часа со вторичным антителом (FITC-конъюгированный Affinity-Pure ослиный антимышиный IgG, каталог № 715-095-150, Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA) с последующей промывкой PBS и закреплением с помощью VectaShield с 4 ‘, 6-диамидино-2-фенилиндолом (Vector Labs, h2200).Клетки визуализировали с помощью микроскопа Olympus BX60 и количественно оценивали с помощью Metamorph.

    Облучение или обработка этопозидом

    Клетки в 24-луночных планшетах облучали при комнатной температуре на воздухе с использованием облучателя Shepherd Mark I 137 Cs. Дозы облучения указаны на рисунках. В качестве альтернативы их инкубировали с различными концентрациями этопозида (Sigma) в течение 1 часа при 37 ° C в увлажненном инкубаторе с 5% CO 2 .

    Клоногенный анализ

    Клетки в 24-луночных планшетах дважды промывали 0.3 мл PBS и трипсинизировали 0,1 мл трипсина. Трипсинизированные клетки ресуспендировали в 0,2-0,3 мл среды и 0,1 мл переносили в 12 мл среды и изотонический раствор для посева и подсчета клеток (счетчик Коултера) соответственно. Клетки высевали на чашки диаметром 100 мм при необходимой концентрации, чтобы получить не более 250 колоний на чашку. Клетки культивировали в течение 8-10 дней в 5% CO 2 для получения жизнеспособных колоний. Жизнеспособная колония определялась как имеющая не менее 50 клеток после 10 дней роста.Выжившую фракцию обработанных клеток нормализовали по эффективности посева контрольных (необработанных) клеток.

    Результаты

    Чтобы определить влияние различных миРНК на экспрессию белка Ku, мы измерили количество Ku70 с помощью вестерн-блоттинга с использованием моноклональных антител против Ku70. Очень небольшое изменение в одной иммунореактивной полосе ~ 70 кДа наблюдалось в общих клеточных лизатах, экстрагированных из линий клеток HeLa, обработанных в течение 24 часов последовательностями-мишенями 4 ( дорожки 4 и 6 ) и 5 ​​( дорожка 7 ) и РНКаза III генерировала миРНК Ku70 ( дорожка 8, ) (рис. 1). Уровень Ku-белка дополнительно снижался после 48 и 72 часов инкубации с миРНК, причем наибольшее снижение наблюдалось через 72 часа. Кроме того, in vitro -транскрибируемая миРНК для целевой последовательности 3 ( дорожка 3 ) также показала значительное снижение, когда клетки обрабатывали миРНК в течение 48 и 72 часов. Это указывает на то, что для максимального ингибирования белка Ku70 требуется от 48 до 72 часов. Клетки HeLa, обработанные скремблированной миРНК ( дорожка 2, ), не оказали заметного влияния на уровни Ku70.Эту миРНК использовали в качестве отрицательного контроля для экспериментов, в которых определяли сенсибилизирующее действие миРНК Ku70. Из пяти миРНК Ku70 последовательности-мишени 4 ( дорожки 4 и 6 ) и 5 ​​( дорожка 7 ) являются наиболее эффективными в подавлении экспрессии Ku70. Генерированная РНКазой III миРНК Ku70 ( дорожка 8, ) ингибировала экспрессию Ku70 менее эффективно, чем миРНК Ku70, генерируемая для целевых последовательностей 3, 4 и 5.

    Рисунок 1.

    Влияние различных миРНК на экспрессию Ku70, измеренное с помощью Вестерн-блоттинг с использованием моноклонального антитела против Ku70 в клетках HeLa. A, Вестерн-блоттинг экстрактов клеточных белков клеток HeLa через 24, 48 и 72 часа после трансфекции миРНК Ku70. Необработанный контроль ( дорожка 1, ), миРНК отрицательного контроля ( дорожка 2, ), in vitro, — транскрибированная миРНК Ku70 для целевой последовательности № 3 ( дорожка 3, ), in vitro, — транскрибированная миРНК Ku70 для целевой последовательности. # 4 ( дорожка 4, ), химически синтезированная миРНК Ku70 для целевой последовательности # 3 ( дорожка 5, ), химически синтезированная миРНК Ku70 для целевой последовательности # 4 ( дорожка 6, ), химически синтезированная миРНК Ku70 для целевой последовательности # 5 ( дорожка 7, ), и РНКаза III генерировала миРНК Ku70 ( дорожка 8, ). B, — график эффектов siRNA на общий белок Ku, количественно оцененный с помощью анализа изображения NIH, график каждой дорожки в геле и представлен как процент от необработанного контроля. Каждый эксперимент повторяли, по крайней мере, трижды с SD, как показано, если только точки не меньше нанесенных на график. Актин, контролирующий загрузку, не показал существенной разницы в загрузке.

    Мы также определили экспрессию белка Ku70 с помощью иммуногистохимии в клетках, трансфицированных химически синтезированной миРНК Ku70 для целевой последовательности 5, поскольку вестерн-блот-анализ показал, что эта миРНК является наиболее эффективной через 72 часа после трансфекции (рис.1Б). Мы нормализовали иммуногистохимическое окрашивание Ku70 с окрашиванием 4 ‘, 6-диамидино-2-фенилиндолом и количество флуоресцентного сигнала от нетрансфицированного контроля (рис. 2А). Относительный флуоресцентный сигнал на клетку был количественно определен с помощью Metamorph и нанесен на график (фиг. 2B). Ku70 siRNA для целевой последовательности 5 снизила экспрессию Ku70 в клетках HeLa до 20%, 40% и 70% через 24, 48 и 72 часа после трансфекции.

    Рисунок 2.

    Иммунофлуоресцентный анализ изображений клеток HeLa, трансфицированных химически синтезированной миРНК Ku70 для целевой последовательности 5.Экспрессия A, Ku70 в клетках HeLa через 24, 48 и 72 ч после трансфекции миРНК Ku70. Клетки визуализировали с помощью микроскопа Olympus BX60. B, — график эффектов Ku70 siRNA (относительная флуоресценция на клетку по сравнению с нетрансфицированным образцом) на общий белок Ku, количественно определенный с помощью метаморфного анализа.

    Из пяти миРНК Ku70 мы протестировали влияние химически синтезированных миРНК для целевой последовательности 5 на ответ на гамма-излучение, поскольку она показала максимальное ингибирование экспрессии Ku70 через 72 часа после трансфекции (рис.1Б). Фиг. 3 иллюстрирует влияние γ-излучения в присутствии воздуха на клоногенное выживание клеток HeLa через 72 часа после трансфекции миРНК Ku70. Полулогарифмический график кривых доза-ответ для контрольных клеток HeLa показал двухфазную кривую с плечом при низких дозах. Эта кривая доза-ответ типична для клеток млекопитающих. Клетки HeLa, обработанные миРНК Ku70 в течение 72 часов, были более чувствительны к индуцированной гамма-излучением гибели клеток, чем контрольные клетки HeLa. Чтобы исключить возможность того, что эффект радиосенсибилизации миРНК Ku70 может быть неспецифическим, мы также определили влияние скремблированной миРНК на ответ клеток HeLa на гамма-излучение.Результаты показали, что радиационный ответ клеток HeLa, трансфицированных скремблированной миРНК, был аналогичен таковому в контроле.

    Рисунок 3.

    Влияние гамма-излучения в присутствии воздуха на клоногенное выживание клеток HeLa через 72 часа после трансфекции миРНК Ku70. Из пяти синтезированных миРНК Ku70 мы проверили влияние химически синтезированных миРНК для целевой последовательности 5 на ответ на гамма-излучение, поскольку она показала 70% ингибирование экспрессии Ku70 через 72 часа после трансфекции. Каждый эксперимент повторяли, по крайней мере, трижды с SD, как показано, если только точки не меньше нанесенных на график.

    Чтобы определить общность этой миРНК Ku70 (CS # 5), мы также протестировали эффекты этой миРНК на клетки карциномы толстой кишки HCT116. Вестерн-блот-анализ с использованием того же моноклонального антитела против Ku70, которое использовалось для клеток HeLa, показал 16% ингибирование Ku70 в общих клеточных лизатах, экстрагированных из HCT116, обработанных в течение 24 часов (фиг. 4, дорожка 3 ). Уровень белка Ku был дополнительно снижен до 70% через 48 часов после трансфекции миРНК Ku70 (рис.4, переулок 6, ). Однако клетки полностью восстанавливались через 72 часа (фиг. 4, , дорожка 9, ) после трансфекции, что позволяет предположить, что максимальный ингибирующий эффект siRNA наблюдался через 48 часов после трансфекции (т.е. несколько раньше, чем клетки HeLa).

    Фигура 4.

    Влияние миРНК на экспрессию Ku70, измеренную с помощью вестерн-блоттинга с использованием моноклонального антитела против Ku70 в клетках HCT116. A, Вестерн-блоттинг экстрактов клеточных белков клеток HCT116 через 24 ( дорожек 1-3 ), 48 ( дорожек 4–6 ) и 72 часа ( дорожек 7–9 ) после трансфекции миРНК Ku70 .Необработанный контроль ( дорожки 1 , 4 и 7 ), миРНК отрицательного контроля ( дорожки 2 , 5 и 8 ), химически синтезированная миРНК Ku70 для целевой последовательности # 5 ( дорожек 3 , 6 и 9 ). B, — график влияния siRNA на общий белок Ku, количественно определенный с помощью анализа изображения NIH, график каждой дорожки в геле и представлен как процент от необработанного контроля. Каждый эксперимент повторяли, по крайней мере, трижды с SD, как показано, если только точки не меньше нанесенных на график.Актин, контролирующий загрузку, не показал существенной разницы в загрузке.

    Чтобы определить корреляцию между экспрессией Ku70 и радиационным ответом, мы подвергли клетки HCT116, трансфицированные Ku70 siRNA (CS # 5), облучению (рис. 5A – C). HCT116, трансфицированный в течение 48 часов, показал значительную сенсибилизацию к радиации (фиг. 5B). Однако клетки, трансфицированные в течение 24 и 72 часов, не показали какой-либо значительной радиационной сенсибилизации (фиг. 5A и C). Таким образом, радиационный отклик соответствовал изменению выражения Ku70.

    Рисунок 5.

    Влияние гамма-излучения в присутствии воздуха на клоногенное выживание клеток карциномы толстой кишки HCT116 через 24, 48 и 72 часа после трансфекции миРНК Ku70. Мы проверили влияние химически синтезированных миРНК для целевой последовательности 5 на ответ на гамма-излучение. Каждый эксперимент повторяли, по крайней мере, трижды с SD, как показано, если только точки не меньше нанесенных на график.

    Другим широко изученным агентом, повреждающим ДНК, является этопозид. Этот препарат вызывает повреждение ДНК, ингибируя топоизомеразу II, что приводит к двухцепочечным разрывам ДНК (15, 24).Поэтому мы измерили кривые зависимости реакции от дозы этопозида для трансфектантов клеток HeLa. Мы снова выбрали для тестирования влияние химически синтезированных миРНК для целевой последовательности 5 ( дорожка 7, ) на реакцию этопозида, поскольку она показала максимальное ингибирование экспрессии Ku70 через 72 часа после трансфекции (фиг. 1B). На фиг. 6 показано влияние 1-часового воздействия различных концентраций этопозида в присутствии воздуха на клоногенное выживание клеток HeLa через 72 часа после трансфекции миРНК Ku70.Клетки HeLa, обработанные миРНК Ku70 в течение 72 часов, были более чувствительны к индуцированному этопозидом уничтожению клеток, чем контрольные клетки HeLa. Результаты со скремблированной миРНК на ответ клеток HeLa на этопозид показали, что этопозидный ответ клеток HeLa, трансфицированных скремблированной миРНК, был аналогичен ответу контрольных клеток.

    Рисунок 6.

    Влияние этопозида в присутствии воздуха на клоногенное выживание клеток HeLa через 72 часа после трансфекции миРНК Ku70. Из пяти синтезированных миРНК Ku70 мы проверили влияние химически синтезированных миРНК для целевой последовательности 5 на реакцию этопозида, поскольку она показала 70% ингибирование экспрессии Ku70 через 72 часа после трансфекции. Каждый эксперимент повторяли, по крайней мере, трижды с SD, как показано, если только точки не меньше нанесенных на график.

    Обработка клеток HCT116 этопозидом также приводила к снижению выживаемости клеток (рис. 7A – C). Однако клетки HCT116, трансфицированные Ku70 siRNA, были намного более чувствительны к этопозиду через 48 часов после трансфекции, чем нетрансфектант (фиг. 7B). Подобно ответу трансфектантов на облучение, HCT116, трансфицированный миРНК Ku70 в течение 24 и 72 часов, не показал какой-либо значительной сенсибилизации или ингибирования экспрессии Ku; предполагая прямую корреляцию между ингибированием Ku70 и ответом на этопозид (рис.7A – C).

    Рисунок 7.

    Влияние этопозида в присутствии воздуха на клоногенное выживание клеток карциномы толстой кишки HCT116 через 24, 48 и 72 часа после трансфекции миРНК Ku70. Мы проверили влияние химически синтезированных миРНК для целевой последовательности 5 на реакцию этопозида. Каждый эксперимент повторяли, по крайней мере, трижды с SD, как показано, если только точки не меньше нанесенных на график.

    Обсуждение

    Было показано, что репарационные белки играют важную роль в ответе клеток на агенты, повреждающие ДНК (24, 25).Однако из-за огромного разнообразия типов повреждений, сложности и количества репаративных белков и их комплексов часто бывает трудно точно определить точную функцию и специфичность повреждения каждого белка. Это особенно верно, потому что некоторые из репарационных мутантов были функционально изолированы до появления современных молекулярных методов. Чтобы решить эту проблему, были охарактеризованы различные мутанты. Часто кажется, что у них отсутствует функция только одного восстанавливающего белка.Было показано, что гетеродимер Ku участвует в репарации двухцепочечных разрывов ДНК посредством негомологичного соединения концов (26–30).

    Излучение производит свободные радикалы в результате случайного радиолиза воды. Известно, что радиация вызывает гибель клеток, прежде всего, под действием групп гидроксильных радикалов, вызывающих двухцепочечные разрывы ДНК. Негомологичное соединение концов играет важную роль в репарации двухцепочечных разрывов ДНК, вызванных γ-излучением (20, 21). Исследования с мутантными клетками грызунов с дефицитом ДНК-PKcs, Ku86 и ДНК-лигазы IV показали, что эти белки важны для негомологичного пути репарации с присоединением концов и выживания после облучения (20, 21).Из этих трех основных белков репарации ДНК Ku играет центральную роль, воспринимая повреждения ДНК и координируя различные белки репарации ДНК (15, 17, 18).

    Яды топоизомеразы II также индуцируют двухцепочечные разрывы ДНК, что приводит к гибели клеток аналогично гамма-излучению. Хотя облучение непосредственно вызывает двухцепочечные разрывы, яды топоизомеразы II вызывают двухцепочечные разрывы, стабилизируя ковалентный промежуточный продукт (комплекс ДНК / топоизомераза II) реакции топоизомеразы II (15, 17, 31). Негомологичное соединение концов, вероятно, является основным путем, участвующим в репарации двухцепочечных разрывов ДНК, продуцируемых ядами топоизомеразы II (15, 17, 32). Роль негомологичного белка репарации концевых соединений Ku в клеточном ответе на яд топоизомеразы II была показана с использованием штаммов XRS с дефицитом репарации двухцепочечных разрывов ДНК (15, 17, 32). Однако недавний отчет показал, что гиперчувствительность наблюдается только в Ku, а не в ДНК-PKcs-дефицитных клетках (33). Таким образом, представленная здесь работа согласуется с доминирующим эффектом истощения Ku70, вызывающего чувствительность как к ионизирующему излучению, так и к этопозиду.

    Для клеток млекопитающих было показано, что недостаток Ku-86 вызывает серьезную радиационную чувствительность в линии хомяков XRS5, и этот мутант характеризуется многими другими повреждениями ДНК, включая чувствительность к ядам топоизомеразы II (15, 17, 18, 32). .Большинство исследователей сосредоточили свое внимание на мутантах с дефицитом репарации ДНК, чтобы изучить механизмы репарации ДНК (16, 28–32), и лишь несколько примеров используют молекулярное нацеливание на репарационные белки для увеличения ответа раковых клеток на агенты, повреждающие ДНК (34). Недавнее открытие того, что небольшие интерферирующие РНК эффективны в подавлении экспрессии генов в клетках млекопитающих, открыло новые возможности для подавления экспрессии репаративного белка (35, 36). Это важно по многим причинам. Напр., Хотя Ku существует как функциональный гетеродимер, мутанты Ku70 не идентифицированы.Кроме того, существует огромная разница в клеточной концентрации белков репарации, при этом клетки человека обычно содержат больше Ku и ДНК-PK, чем клетки хомяка. Неизвестно, почему это должно быть так, особенно потому, что человеческие клетки обычно более чувствительны, чем их аналоги хомяка. Наши результаты теперь показали, что миРНК Ku70 можно использовать для ингибирования синтеза белка Ku в раковых клетках человека и что это вызывает сенсибилизацию к ионизирующему излучению и этопозиду. Этот результат, возможно, является неожиданным, потому что даже при максимальном ингибировании Ku70, о котором здесь сообщается (~ 70% истощение), клетки содержат намного больше Ku, чем нормальные клетки хомяка.

    Эффективность различных полученных siRNA сильно варьировалась. Только три из пяти миРНК Ku70 оказались высокоэффективными в подавлении экспрессии белка Ku. РНКаза III генерировала миРНК Ku70, также снижала белок Ku, но с гораздо меньшей эффективностью. Очевидно, будет интересно продолжить поиски более эффективного истощения Ku70, и в настоящее время мы работаем над созданием стабильной siRNA. Эффективность истощения Ku70 точно коррелировала с изменениями радиационной и этопозидной чувствительности как количественно, так и качественно.Наши результаты показывают, что Ku70 должен быть истощен по крайней мере на 70%, чтобы значительно изменить реакцию на повреждение ДНК.

    Мы недавно показали, что гибель клеток, вызванная гамма-излучением, может быть усилена гидроксиэтилдисульфидом, оксидантом тиола, в мутантных клетках яичников китайского хомячка с дефицитом глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (10). Эта модификация радиационного ответа хорошо коррелировала с дефектами репарации двухцепочечных разрывов ДНК и потерей связывания Ku с концами ДНК (10, 14). Более высокое уничтожение клеток на два логарифма и 70% ингибирование репарации двухцепочечных разрывов ДНК и связывания Ku в клетках яичника китайского хомячка с мутантной глюкозо-6-фосфатдегидрогеназой предполагают, что ингибирование функции белка Ku будет высокоэффективным в повышении чувствительности раковых клеток к γ. радиация и другие химиотерапевтические агенты, повреждающие ДНК (10, 14).Однако опосредованная гидроксиэтилдисульфидом потеря функции Ku в результате модификации протеина тиолом эффективна только в клетках с дефицитом глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (10, 14). Наши результаты впервые показали, что трансфекция раковых клеток HeLa и HCT116 миРНК Ku70 значительно усиливает ответ на гамма-излучение и химиотерапевтический агент этопозид.

    Эти текущие результаты предполагают, что нацеливание на Ku-белок с помощью Ku70 siRNA является возможным подходом к терапии рака.Это также увеличило возможности нацеливания на другие белки репарации ДНК либо отдельно, либо в сочетании с миРНК Ku70, чтобы увеличить ответ раковых клеток на агенты, повреждающие ДНК (36).

    Благодарности

    Мы благодарим Тима Нортона (Университет Пенсильвании) и Энджи Ченг (Ambion, Inc.) за их техническую помощь.

    Footnotes

    • ↵3 J.E. Biaglow et al., Личное сообщение.

    • Грантовая поддержка: Грант на исследования Национального института рака CA 92108.

    • Расходы на публикацию этой статьи были частично покрыты за счет оплаты страницы. Таким образом, данная статья должна быть обозначена как реклама в соответствии с 18 U.S.C. Раздел 1734 исключительно для указания этого факта.

      • Принято 21 февраля 2005 г.
      • Получено 21 мая 2004 г.
      • Исправление получено 20 января 2005 г.
    • Американская ассоциация исследований рака

    Ссылки

    1. Coleman CN.Молекулярная биология в радиационной онкологии. Перспективы радиационной онкологии BRCA1 и BRCA2. Acta Oncol 1999; 38: 55–9.

    2. Grunbaum U, Meye A, Bache M, et al. Трансфекция mdm2-антисмысловой или wtp53 приводит к радиосенсибилизации и усилению апоптоза линии клеток саркомы мягких тканей. Anticancer Res 2001; 21: 2065–71.

    3. Харрис М., Кэй С.Б. Последние достижения в лечении эпителиального рака яичников. Мнение эксперта, исследующее наркотики, 2001; 10: 1715–24.

    4. Murren JR. Обоснование применения неплатиновой химиотерапии при распространенном НМРЛ. Онкология 2001; 15: 29–34.

    5. Kaufmann SH. Гибель клеток, вызванная лекарствами, направленными на топоизомеразу: больше вопросов, чем ответов. Biochim Biophys Acta 1998; 1400: 195–211.

    6. Ньютон HB. Химиотерапия для лечения метастатических опухолей головного мозга. Эксперт Rev Anticancer Ther 2002; 2: 495–506.

    7. Ruckdeschel JC.Будущие направления немелкоклеточного рака легкого: постоянная перспектива. Онкология 1998; 12: 90–6.

    8. Grant S, Roberts JD. Использование ингибиторов циклинзависимой киназы отдельно или в комбинации с признанными цитотоксическими лекарственными средствами в химиотерапии рака. Обновление Drug Resist 2003; 6: 15–26.

    9. Baker A, Payne CM, Briehl MM, Powis G. Тиоредоксин, ген, сверхэкспрессируемый при раке человека, ингибирует апоптоз in vitro и in vivo .Cancer Res 1997; 57: 5162–7.

    10. Айен И.С., Кох С.Дж., Таттл ЮЗ, Стамато Т.Д., Перес М.Л., Биаглоу Дж. Э. Окисление клеточных тиолов гидроксиэтилдисульфидом ингибирует повторное соединение двухцепочечных разрывов ДНК в G6PD-дефицитных клетках млекопитающих. Int J Radiat Biol 2000; 76: 1523–31.

    11. Bristow RG, Benchimol S, Hill RP. Ген p53 как модификатор внутренней радиочувствительности: значение для лучевой терапии. Радиотер Онкол 1996; 40: 197–223.

    12. Endo K, Kuratate I, Watanabe M, et al.Трансфекция гена p53 дикого типа в культивируемых саркомах человека: эффект CDDP. Онкол Реп 2001; 8: 637–42.

    13. Харни Дж. В., Сеймур С. Б., Мерфи Д. М., Мазерсилл С. Вариация экспрессии онкопротеинов p53, c-myc и bcl-2 в культурах отдельных пациентов нормального уротелия, подвергшихся воздействию γ-лучей кобальта 60 и N -нитрозодиэтаноламин. Эпидемиологические биомаркеры рака до 1995 г .; 4: 617–25.

    14. Айен И.С., Бернхард Э.Дж., Мушел Р.Дж., Маккенна В.Г., Криш Р.Э., Кох С.Дж.ДНК как важная мишень в радиационно-индуцированном апоптозе клеток, трансфицированных онкогеном myc и myc плюс ras. Int J Radiat Biol 2000a; 76: 343–55.

    15. Кальдекотт К., Бэнкс Г., Джегго П. Пути репарации двухцепочечных разрывов ДНК и клеточная толерантность к ингибиторам топоизомеразы II. Cancer Res 1990; 50: 5778–83.

    16. Getts RC, Stamato TD. Отсутствие Ku-подобной активности связывания концов ДНК у мутанта с дефицитом репарации двухцепочечной ДНК xrs.J Biol Chem 1994; 269: 15981–4.

    17. Jeggo PA, Caldecott K, Pidsley S, Banks GR. Чувствительность мутантов яичников китайского хомячка, дефектных по репарации двухцепочечных разрывов ДНК, к ингибиторам топоизомеразы II. Cancer Res 1989; 49: 7057–63.

    18. Kemp LM, Sedgwick SG, Jeggo PA. Рентгеночувствительные мутанты клеток СНО, дефектные по повторному соединению двухцепочечного разрыва. Mutat Res 1984; 132: 189–96.

    19. Taccioli GE, Gottlieb TM, Blunt T, et al.Продукт Ku80 гена XRCC5 и его роль в репарации ДНК и рекомбинации V (D) J. Наука 1994; 265: 1442–5.

    20. Featherstone C, Jackson SP. Ku, белок репарации ДНК с множеством клеточных функций. Mutat Res 1999; 434: 3–15.

    21. Jeggo PA. Идентификация генов, участвующих в репарации двухцепочечных разрывов ДНК в клетках млекопитающих. Radiat Res 1998; 150: S80–91.

    22. Чжан В.В., Янева М. Восстановленные сульфгидрильные группы необходимы для связывания ДНК белка Ku.Biochem J 1993; 293: 769–74.

    23. Айен И.С., Стамато Т.Д., Маулдин С.К. и др. Мутация в гене глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы приводит к инактивации связывания конца Ku-ДНК во время окислительного стресса. J Biol Chem 2002; 277: 9929–35.

    24. Pommier Y. ДНК-топоизомеразы и их ингибирование антрациклинами. В: Прибе В., редактор. Антрациклиновые антибиотики. Вашингтон, округ Колумбия: Am Chem Soc; 1995. стр. 183–203.

    25. Jeggo PA, Kemp LM.Рентгеночувствительные мутанты линий клеток яичников китайского хомячка: изоляция и перекрестная чувствительность к другим агентам, повреждающим ДНК. Mutat Res 1983; 112: 313–27.

    26. Blunt T, Finnie NJ, Taccioli GE и др. Дефектная ДНК-зависимая активность протеинкиназы связана с рекомбинацией V (D) J и дефектами репарации ДНК, связанными с мутацией scid мыши. Cell 1995; 80: 813–23.

    27. Smider V, Rathmell WK, Lieber MR, Chu G. Восстановление устойчивости к рентгеновским лучам и рекомбинации V (D) J в мутантных клетках с помощью кДНК Ku.Science 1994; 266: 288–91.

    28. Critchlow SE, Bowater RP, Jackson SP. Белок репарации двухцепочечных разрывов ДНК млекопитающих XRCC4 взаимодействует с ДНК-лигазой IV. Curr Biol 1997; 7: 588–98.

    29. Gottlieb TM, Jackson SP. ДНК-зависимая протеинкиназа: потребность в концах ДНК и ассоциация с Ku-антигеном. Cell 1993; 72: 131–42.

    30. Grawunder U, Wilm M, Wu X и ​​др. Активность ДНК-лигазы IV стимулируется комплексообразованием с белком XRCC4 в клетках млекопитающих.Nature 1997; 388: 492–5.

    31. Li Z, Otevreil T, Gao Y, et al. Ген XRCC4 кодирует новый белок, участвующий в репарации двухцепочечных разрывов ДНК и рекомбинации V (D) J. Cell 1995; 83: 1079–89.

    32. Мимори Т., Хардин Дж. Механизм взаимодействия Ku-белка с ДНК. J Biol Chem 1986; 261: 10375–9.

    33. Кэплен, штат Нью-Джерси, Пэрриш С., Имани Ф, Файр А., Морган Р.А. Специфическое ингибирование экспрессии генов небольшими двухцепочечными РНК в системах беспозвоночных и позвоночных.Proc Natl Acad Sci U S. A 2001; 98: 9742–7.

    34. Elbashir SM, Harborth J, Lendeckel W., Yalcin A, Weber K, Tuschl T. Дуплексы 21-нуклеотидной РНК опосредуют РНК-интерференцию в культивируемых клетках млекопитающих. Природа 2001; 411: 494–8.

    35. Jin S, Inoue S, Weaver DT. Дифференциальная чувствительность к этопозиду клеток, дефицитных по компонентам Ku и DNA-PKcs ДНК-зависимой протеинкиназы. Канцерогенез 1998; 19: 965–71.

    36. Peng Y, Zhang Q, Nagasawa H, Okayasu R, Liber HL, Bedford JS.Подавление экспрессии каталитической субъединицы ДНК-зависимой протеинкиназы малой интерферирующей РНК сенсибилизирует человеческие клетки на радиационно-индуцированное повреждение хромосом, уничтожение клеток и мутации. Cancer Res 2002; 62: 6400–44.

    LNB диапазона Ka, LNB диапазона Ku, LNB диапазона X и LNB диапазона C

    R9000A *
    DRO LNB диапазона Ka
    * Доступны другие диапазоны
    18,20-19,20 ГГц 17,25 ГГц 1/2 МГц 1.60 дБ -50 дБн 55 дБ
    R9000IA *
    ФАПЧ Ka-диапазона LNB
    * Доступны другие диапазоны
    18,20-19,20 ГГц 17,25 ГГц 10/25/50 кГц 1,50 / 1,60 дБ -70 дБн 58 дБ
    R9000XA * ​​
    Ka-диапазон EXT LNB
    * Доступны другие диапазоны
    18.20-19,20 ГГц 17,25 ГГц Фаза синхронизирована с EXT Ref 1,50 / 1,60 дБ -70 дБн 58 дБ
    R9000A-O3bA *
    Ka-диапазон Авто Ref LNB
    * Доступны другие диапазоны
    17,852-18,588 ГГц 16,80 ГГц Автоматическое переключение Арт.
    10/25/50 кГц
    1.50 дБ -70 дБн 58 дБ
    RD9000IAB *
    Ka Двухдиапазонный LNB с ФАПЧ
    * Доступны другие диапазоны
    18,20-19,20 ГГц
    19,20-20,20 ГГц
    17,25 ГГц
    18,25 ГГц
    10/25/50 кГц
    1,50 / 1,60 дБ
    -70 дБн
    58 дБ
    RD9000XAB *
    Ka Двухдиапазонный EXT LNB
    * Доступны другие диапазоны
    18.20-19,20 ГГц
    19,20-20,20 ГГц
    17,25 ГГц
    18,25 ГГц
    Фаза синхронизирована с EXT Ref
    1,50 / 1,60 дБ
    -70 дБн
    58 дБ
    RD9000A-O3b
    Ka Двухдиапазонный автоматический Ref LNB
    17,852-18,588 ГГц
    18.372-19.300 ГГц
    16,80 ГГц
    17,40 ГГц
    Автоматическое переключение Арт.
    10/25/50 кГц
    1,50 дБ -70 дБн 58 дБ
    RT9000IA3A4B2
    Ka Трехдиапазонный LNB с ФАПЧ
    17.30-18.30 ГГц
    18.30-19.30 ГГц
    19,30-20,20 ГГц
    16.35 ГГц
    17,35 ГГц
    18,35 ГГц
    10/25/50 кГц 1,60 дБ -70 дБн 65 дБ
    RT9000XA3A4B2
    Ka Трехдиапазонный EXT LNB
    17.30-18.30 кГц
    18.30-19.30 кГц
    19,30-20,20 кГц
    16,35 кГц
    17,35 кГц
    18,35 кГц
    Фаза синхронизирована с EXT Ref
    1.60 дБ -70 дБн 65 дБ
    RT9315A-ISO-m Мощность
    м Мощность
    Ka Трехдиапазонный автоматический Ref LNB
    17,70–18,70 ГГц
    18,45-19,45 ГГц
    19,20-20,20 ГГц
    16,75 ГГц
    17,50 ГГц
    18,25 ГГц
    Автоматическое переключение Арт.
    10 кГц
    1.5 дБ -70 дБн 55 дБ
    RQ9000I
    Ka Четырехдиапазонный PLL LNB
    17.00-18.00 ГГц
    18,00-19,00 ГГц
    19,00-20,00 ГГц
    20,00–21,00 ГГц
    16,05 ГГц
    17,05 ГГц
    18,05 ГГц
    19,05 ГГц
    10/25/50 кГц 2,20 дБ -70 дБн 58 дБ
    RQ9000X
    Ka Четырехдиапазонный EXT LNB
    17.00-18.00 ГГц
    18,00-19,00 ГГц
    19,00-20,00 ГГц
    20,00–21,00 ГГц
    16,05 ГГц
    17,05 ГГц
    18,05 ГГц
    19,05 ГГц
    Фаза синхронизирована с EXT Ref 2,20 дБ -70 дБн 58 дБ
    RP9000I-1
    Ka Penta-band PLL LNB
    17.20-18,20 ГГц
    18,20-19,20 ГГц
    19,20-20,20 ГГц
    20,20–21,20 ГГц
    21,20–22,20 ГГц
    16,20 ГГц
    17,20 ГГц
    18,20 ГГц
    19,20 ГГц
    20,20 ГГц
    10 кГц 2,5 дБ -70 дБн 60 дБ
    RP9000X-1
    Ka Пятидиапазонный EXT LNB
    17.20 — 18,20 ГГц
    18,20 — 19,20 ГГц
    19,20 — 20,20 ГГц
    20,20 — 21,20 ГГц
    21,20 — 22,20 ГГц
    16,20 ГГц
    17,20 ГГц
    18,20 ГГц
    19,20 ГГц
    20,20 ГГц
    Фаза синхронизирована с внешним
    ссылка
    2,5 дБ -70 дБн 60 дБ
    RW9018I
    Ka Широкополосный PLL LNB
    17.7-20,2 ГГц 16,45 ГГц 10, 25, 50 кГц 1,8 дБ -70 дБн 58 дБ
    RW9018X
    Ka Широкополосный EXT LNB
    17,7–20,2 ГГц 16,45 ГГц Фаза синхронизирована с внешним
    ссылка
    1,8 дБ -70 дБн 58 дБ
    R2829I, R2930I
    Ka Tx-band PLL LNB
    28.00-29,00 ГГц
    29,00-30,00 ГГц
    27,05 ГГц
    28,05 ГГц
    10/25/50 кГц 5,50 дБ -70 дБн 45 дБ
    R2829X, R2930X
    Ka Диапазон передачи EXT LNB
    28,00-29,00 ГГц
    29,00-30,00 ГГц
    27,05 ГГц
    28,05 ГГц
    Фаза синхронизирована с EXT Ref 5.50 дБ -70 дБн 48 дБ
    RT2730X
    Ka Tx Трехдиапазонный EXT LNB
    27,0 — 28,0 ГГц
    28,0 — 29,0 ГГц
    29,0 — 30,0 ГГц
    26,05 ГГц
    27,05 ГГц
    28,05 ГГц
    Фаза синхронизирована с EXT Ref 7,0 дБ -68 дБн / Гц 48 дБ

    BUC в Ka-диапазоне, BUC в Ku-диапазоне, BUC в диапазоне X и BUC в диапазоне C

    TQ3001
    Ka Четырехдиапазонный BUC 1 Вт
    950-1450 МГц
    для каждой полосы
    28.05 ГГц
    28,55 ГГц
    29,05 ГГц
    29,55 ГГц
    29,00–29,50 ГГц
    29,50-30,00 ГГц
    30,00-30,50 ГГц
    30,50–31,00 ГГц
    30 дБм
    -73 дБн
    20 дБ
    + 28 В постоянного тока
    40 Вт
    T2705, T2805
    Ka-диапазон 5 Вт BUC
    1052-1788 МГц
    972-1871 МГц
    26.60 ГГц
    27,20 ГГц
    27,652–28,388 ГГц
    28,172–29,071 ГГц
    37 дБм -73 дБн 65 дБ
    + 48 В постоянного тока
    88 Вт
    T2905, T29E05, T3005
    Ka-диапазон 5 Вт BUC
    950-1450 МГц
    1000-2000 МГц
    1000-2000 МГц
    28,55 ГГц
    28.00 ГГц
    29,00 ГГц
    29,50-30,00 ГГц
    29,00-30,00 ГГц
    30,00–31,00 ГГц
    37 дБм -73 дБн 65 дБ
    + 48 В постоянного тока
    88 Вт
    TD2805
    Ka Двухдиапазонный 5 Вт BUC
    1052-1788 МГц
    972-1871 МГц
    26,60 ГГц
    27,20 ГГц
    27.652-28,388 ГГц
    28,172–29,071 ГГц
    37 дБм -73 дБн 65 дБ
    + 48 В постоянного тока
    88 Вт
    TD3005
    Ka Двухдиапазонный 5 Вт BUC
    1000-2000 МГц для каждой полосы 28,00 ГГц
    29,00 ГГц
    29,00-30,00 ГГц
    30,00–31,00 ГГц
    37 дБм -73 дБн 65 дБ + 48 В постоянного тока
    88 Вт
    M-TT2905
    Ka Трехдиапазонный 5 Вт BUC
    Мобильность
    950-1950 ГГц
    для каждой полосы
    B26.55 ГГц
    27,30 ГГц
    28,05 ГГц
    27,50–28,50 ГГц
    28,25-29,25 ГГц
    29,00-30,00 ГГц
    37 дБм -73 дБн 68 дБ тип.
    10 дБ с шагом 0,5 дБ
    36Вт @Plin
    M-T2905, M-T29E05,
    M-T3005
    Ka-диапазон 5 Вт BUC
    Мобильность
    950 — 1450 МГц
    1000-2000 МГц
    1000-2000 МГц
    28.55 ГГц
    28,0 ГГц
    29,0 ГГц
    29,5 — 30,0 ГГц
    29,0 — 30,0 ГГц
    30,0 — 31,0 ГГц
    37 дБм -73 дБн 65 дБ
    15 дБ, шаг 1 дБ
    + 48 В постоянного тока
    88 Вт
    T2710, T2810
    Ka-диапазон 10 Вт BUC
    1052-1788 МГц
    972-1871 МГц
    26.60 ГГц
    27,20 ГГц
    27,652–28,388 ГГц
    28,172–29,071 ГГц
    40 дБм -73 дБн 65 дБ макс.
    15 дБ, шаг 1 дБ
    + 48 В постоянного тока
    170 Вт
    T2910, T29E10, T3010
    Ka-диапазон 10 Вт BUC
    950-1450 МГц
    1000-2000 МГц
    1000-2000 МГц
    28.55 ГГц
    28,00 ГГц
    29,00 ГГц
    29,50-30,00 ГГц
    29,00-30,00 ГГц
    30,00–31,00 ГГц
    40 дБм -73 дБн 65 дБ макс.
    15 дБ, шаг 1 дБ
    + 48 В постоянного тока
    170 Вт
    M-T27L10
    Ka-диапазон 10 Вт BUC
    Мобильность
    950-1450 ГГц 26.05 ГГц 27,00–27,50 ГГц 37 дБм -73 дБн 65 дБ
    15 дБ, шаг 1 дБ
    + 48 В постоянного тока
    130 Вт
    М-Т2910, М-Т29Е10,
    M-T3010
    Ka-диапазон 10 Вт BUC
    Мобильность
    950-1450 МГц
    1000-2000 МГц
    1000-2000 МГц
    28,55 ГГц
    28.0 ГГц
    29,0 ГГц
    29,5 — 30,0 ГГц
    29,0 — 30,0 ГГц
    30,0 — 31,0 ГГц
    38 дБм -73 дБн 71 дБ
    15 дБ, шаг 1 дБ
    + 48 В постоянного тока
    63 Вт
    TD2810
    Ka Двухдиапазонный 10 Вт BUC
    1052-1788 МГц
    972-1871 МГц
    26,60 ГГц
    27.20 ГГц
    27,652–28,338 ГГц
    28,172–29,071 ГГц
    40 дБм -73 дБн 65 дБ макс.
    15 дБ, шаг 1 дБ
    + 48 В постоянного тока
    170 Вт
    TD3010
    Ka Двухдиапазонный 10 Вт BUC
    1000-2000 МГц
    для каждой полосы
    28,00 ГГц
    29,00 ГГц
    29.00–30.00 ГГц
    30,00–31,00 ГГц
    40 дБм -73 дБн 65 дБ
    15 дБ, шаг 1 дБ
    + 48 В постоянного тока
    170 Вт
    M-TD3010
    Ka Двухдиапазонный 10 Вт BUC Mobility
    950 — 1950 МГц для каждой полосы 28,05 ГГц
    29,05 ГГц
    29,0 — 30,0 ГГц
    30,0 — 31,0 ГГц
    38 дБм -73 дБн 71 дБ тип 63Вт @Plin
    M-TT2910
    Ka Трехдиапазонный 10 Вт BUC
    Мобильность
    950-1950 ГГц
    для каждой полосы
    26.55 ГГц
    27,30 ГГц
    28,05 ГГц
    27,50–28,50 ГГц
    28,25-29,25 ГГц
    29,00-30,00 ГГц
    40 дБм -73 дБн 71 дБ
    10 дБ 0,5 дБ с шагом
    63Вт @Plin
    T2720, T2820
    Ka-диапазон 20 Вт BUC
    1052-1788 МГц
    972-1872 МГц
    26,60 ГГц
    27.20 ГГц
    27,652–28,388 ГГц
    28,172–29,071 ГГц
    43 дБм -73 дБн 70 дБ
    15 дБ, шаг 1 дБ
    + 48 В постоянного тока
    250 Вт
    T2920, T29E20, T3020
    Ka-диапазон 20 Вт BUC
    950-1450 МГц
    1000-2000 МГц
    1000-2000 МГц
    28,55 ГГц
    28,00 ГГц
    29.00 ГГц
    29,50-30,00 ГГц
    29,00-30,00 ГГц
    30,00–31,00 ГГц
    43 дБм -73 дБн 70 дБ
    15 дБ, шаг 1 дБ
    + 48 В постоянного тока
    250 Вт
    TD2820
    Ka Двухдиапазонный 20 Вт BUC
    1052-1788 МГц
    972-1871 МГц
    26,60 ГГц
    27,20 ГГц
    27.652-28,338 ГГц
    28,172–29,071 ГГц
    43 дБм -73 дБн 70 дБ
    15 дБ, шаг 1 дБ
    + 48 В постоянного тока
    250 Вт
    TD3020
    Ka Двухдиапазонный 20 Вт BUC
    1000-2000 МГц
    для каждой полосы
    28,00 ГГц
    29,00 ГГц
    29,00-30,00 ГГц
    30,00–31,00 ГГц
    43 дБм -73 дБн 70 дБ
    15 дБ, шаг 1 дБ
    + 48 В постоянного тока
    250 Вт
    M-TT2920
    Ka Трехдиапазонный 20 Вт BUC
    Мобильность
    950-1950 МГц
    для каждой полосы
    26.55 ГГц
    27,30 ГГц
    28,05 ГГц
    27,50–28,50 ГГц
    28,25-29,25 ГГц
    29,00-30,00 ГГц
    43 дБм -73 дБн 74 дБ тип.
    10 дБ 0,5 дБ с шагом
    125 Вт @Plin
    M-T2930, M-T29E30, M-T3030
    Ka-диапазон 30 Вт
    Мобильность
    950 — 1450 МГц
    1000-2000 МГц
    1000-2000 МГц
    28.55 ГГц
    28,00 ГГц
    29,00 ГГц
    29,50 — 30,00 ГГц
    29,00 — 30,00 ГГц
    30,00 — 31,00 ГГц
    45 дБм -73 дБн
    77 дБ тип.
    10 дБ, шаг 0,5 дБ
    + 20 В постоянного тока
    230 Вт
    T2740, T2840
    Ka-диапазон 40 Вт BUC
    1052-1788 МГц
    972-1871 МГц
    26.60 ГГц
    27,20 ГГц
    27,652–28,388 ГГц
    28,172–29,071 ГГц
    46 дБм -73 дБн 70 дБ
    15 дБ, шаг 1 дБ
    + 48 В постоянного тока
    480 Вт
    T2940, T29E40, T3040
    Ka-диапазон 40 Вт BUC
    950-1450 МГц
    1000-2000 МГц
    1000-2000 МГц
    28.55 ГГц
    28,00 ГГц
    29,00 ГГц
    29,50-30,00 ГГц
    29,00-30,00 ГГц
    30,00–31,00 ГГц
    46 дБм -73 дБн 70 дБ
    15 дБ, шаг 1 дБ
    + 48 В постоянного тока
    480 Вт
    TD2840
    Ka Двухдиапазонный 40 Вт BUC
    1052-1788 МГц
    972-1871 МГц
    26.60 ГГц
    27,20 ГГц
    27,652–28,338 ГГц
    28,172–29,071 ГГц
    46 дБм -73 дБн 70 дБ
    15 дБ, шаг 1 дБ
    + 48 В постоянного тока
    480 Вт
    TD3040
    Ka Двухдиапазонный 40 Вт BUC
    1000-2000 МГц
    для каждой полосы
    28,00 ГГц
    29,00 ГГц
    29.00-30.00 ГГц
    30,00–31,00 ГГц
    46 дБм -73 дБн 70 дБ
    15 дБ, шаг 1 дБ
    + 48 В постоянного тока
    480 Вт
    M-TT2940
    Ka Трехдиапазонный 40 Вт BUC
    Мобильность
    950-1950 ГГц
    для каждой полосы
    26,55 ГГц
    27,30 ГГц
    8,05 ГГц
    27.50-28.50 ГГц
    28,25-29,25 ГГц
    29,00-30,00 ГГц
    46 дБм -73 дБн 77 дБ тип.
    10 дБ 0,5 дБ с шагом
    250 Вт @Plin

    Направления | Международный прием

    Добраться сюда легко — Лоуренс находится на I-70, всего в 45 минутах езды от международного аэропорта Канзас-Сити. I-70 202 — это самый прямой путь к кампусу KU.

    Вы должны заплатить за парковку в гараже на Миссисипи-стрит. Больше информации.

    При выходе из аэропорта следуйте указателям на Topeka, которые будут направлять вас к:

    1. Поверните налево на съезд 29 N / 435 W в сторону St. Joseph / Topeka. Продолжайте движение 3,5 мили
    2. Сверните на выезд 17 на 435 южной широты в сторону Топики и пройдите 29 миль.
    3. Сверните на съезд 12 на 70 W / Kansas Turnpike в сторону Топики и пройдите 25 миль.
    4. Сверните на съезд 202 «West Lawrence» и заплатите за проезд (около 2 долларов.00)
    5. После пункта взимания платы вы поедете на юг по Макдональд-Драйв. Вы пройдете под эстакадой и выйдете на улицу Айова-стрит.
    6. Поверните налево с Айова-стрит на Девятую улицу.
    7. Поверните направо с Девятой улицы на улицу Миссисипи.
    8. Двигайтесь по Миссисипи-стрит мимо 11-й улицы и выезжайте на кампус. Слева вы увидите гараж для посетителей.
    9. Пешком по бульвару Джейхок до Стронг-Холла. Международный прием находится в комнате 45. Добро пожаловать в KU!
    1. Сверните на съезд 202, West Lawrence и заплатите за проезд
    2. .
    3. После пункта взимания платы вы поедете на юг по Макдональд-Драйв.Вы пройдете под эстакадой и выйдете на улицу Айова-стрит.
    4. Поверните налево с Айова-стрит на Девятую улицу.
    5. Поверните направо с Девятой улицы на улицу Миссисипи.
    6. Двигайтесь по Миссисипи-стрит мимо 11-й улицы и выезжайте на кампус. Слева вы увидите гараж для посетителей.
    7. Пешком по бульвару Джейхок до Стронг-Холла. Международный прием находится в комнате 45. Добро пожаловать в KU!
    1. Двигайтесь по шоссе Kansas 10 (K-10) на запад в сторону Лоуренса.Продолжайте ехать через Лоуренс примерно 3,25 мили.
    2. Поверните направо на Айова-стрит.
    3. Поверните направо с Айова-стрит на Девятую улицу.
    4. Поверните направо с Девятой улицы на улицу Миссисипи.
    5. Двигайтесь по Миссисипи-стрит мимо 11-й улицы и выезжайте на кампус. Слева вы увидите гараж для посетителей.
    6. Пешком по бульвару Джейхок до Стронг-Холла. Международный прием находится в комнате 45. Добро пожаловать в KU!
    1. Взять U.S. 59 Шоссе на север в Лоуренс. Продолжайте ехать через Лоуренса до Девятой улицы.
    2. Поверните направо на Девятую улицу.
    3. Поверните направо с Девятой улицы на улицу Миссисипи.
    4. Двигайтесь по Миссисипи-стрит мимо 11-й улицы и выезжайте на кампус. Слева вы увидите гараж для посетителей.
    5. Пешком по бульвару Джейхок до Стронг-Холла. Международный прием находится в комнате 45. Добро пожаловать в KU!

    МШУ с одной резьбой — диапазон Ku, МШУ / МШУ

    МШУ с одной резьбой — диапазон Ku

    Номер модели Частота работы Шумовая температура Усиление (дБ) Выходная мощность (P1 дБ — мин.)
    10.95 — 12,75 ГГц 65 ° К 60 дБ +12
    10,95 — 12,75 ГГц 70 ° К 60 дБ +12
    10.70 — 12,75 ГГц 65 ° К 60 дБ +12
    10,70 — 12,75 ГГц 70 ° К 60 дБ +12

    Сноски :
    Таблицы данных доступны по запросу.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *